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人小扁豆素结合型甲胎蛋白L3(AFP-L3)ELISA试剂盒
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产品规格
可售数量: 1000盒可售
名称:人小扁豆素结合型甲胎蛋白L3(AFP-L3)ELISA试剂盒
规格:48T/96T
原理:ELISA是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的 催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术
包括:人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等等
标本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。
样品收集、处理及保存方法
1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
人小扁豆素结合型甲胎蛋白L3(AFP-L3)ELISA试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 (2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
(4)阴性对照孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2, 终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
注:所用溶液配方
(1) PBS:称取0.2g KH2P04, 2.9g Na2HP0412H20、8.0g NaCl, 0.2g KCl,加双蒸水至1000ml。
(2)包被缓冲液:称取1.59g Na2CO3, 2.938 NaHCO3,加双蒸水至 1000m1。
(3)洗涤液(PBST):含0.05% Tween-20的PBS。
(4)稀释液:含0.1%牛血清白蛋白(BSA)的PBS,主要用以稀释抗体、标准品、样品。
(5)TMB显色液:称取1.84g Na2HP04.12H20, 0.51 g柠檬酸,加双蒸水至1O0ml,配成柠檬酸-磷suan缓冲溶液。用10.5 ml 柠檬酸-磷suan缓冲溶液溶解1锭TMB,再加入35μl 3% H2O2
(6)细胞裂解液:1% TritonX-100,137mmol/L NaCl,20mmol/L Tris-HCl,2mmol/L EDTA,1mmol/L PMSF,pH 7.4。(其中PMSF溶于异丙chun中,配成1O mmo/L,-20℃ 贮存备用。保存条件及有效期:
1.试剂盒保存:;2-8℃。2.有效期:6个月
公司主营人小扁豆素结合型甲胎蛋白L3(AFP-L3)ELISA试剂盒,产品服务于生物科研领域。致力为中国生命科学研究领域的科研工作者提供高品质产品,产品囊括细胞因子系列,内分泌系列,特种蛋白系列,肿瘤以及自身免疫系列等多个优势系列。产品种类齐全指标上千万种,原料均采用进口试剂,引进国外生产工艺,质量稳定可靠,性价比高,深受广大用户的信赖。
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人小扁豆素结合型甲胎蛋白L3(AFP-L3)ELISA试剂盒
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